Compara el m/z observado con el ion esperado para la misma carga y aducto, o compara masas deconvolucionadas y teóricas sobre la misma base. Una masa intacta compatible apoya la identidad; la secuencia y la estereoquímica pueden necesitar más pruebas.
Leer juntos el cromatograma y el espectro
La cromatografía líquida separa componentes en el tiempo. El espectro de masas representa señales iónicas por relación masa/carga, m/z. Identifica primero el pico cromatográfico o el intervalo del que procede el espectro. El cromatograma de corriente iónica total suma las señales del intervalo de masas usado. Un cromatograma de ion extraído sigue una ventana concreta de m/z. Una señal intensa en esa ventana no excluye la presencia simultánea de otros iones.
Un espectro puede contener iones protonados, aductos y picos isotópicos. Comprueba la carga y la fórmula del ion antes del cálculo teórico. Distingue la masa monoisotópica, basada en isótopos concretos, de la masa media basada en abundancias isotópicas. Una masa neutra deconvolucionada se deriva de las señales medidas y de sus asignaciones.
IUPAC, Definitions of terms relating to mass spectrometry (2013)
Calcular carga y error de masa
El ejemplo ficticio usa una masa neutra monoisotópica de 1000,0000 Da. Para un ion protonado, m/z = (M + z × mₚ) ÷ z, con mₚ ≈ 1,007276 Da. Así, [M + 2H]²⁺ tiene m/z ≈ 501,0073 y [M + 3H]³⁺, m/z ≈ 334,3406. El cálculo inverso es M = z × (m/z − mₚ). Otros aductos requieren la fórmula iónica correspondiente.
Si el ion de carga +2 se mide a m/z 501,0088, el error con signo usando la teoría sin redondear es aproximadamente +3,0 ppm: (observado − esperado) ÷ esperado × 1000000. Compara m/z con m/z o masa neutra con masa neutra. En una comparación independiente, una masa deconvolucionada de 1000,0030 Da frente a 1000,0000 Da también da +3,0 ppm. Son bases de comparación distintas.
El informe ficticio MS-DEMO-02 especifica ±5 ppm para la masa neutra monoisotópica. El ejemplo concuerda dentro de esa tolerancia documentada; no establece una tolerancia universal para otros métodos.
Modelo didáctico sintético: no es una medición de laboratorio.
| Ion | Carga | m/z esperado | Masa neutra |
|---|---|---|---|
| [M + 2H]²⁺ | +2 | 501,0073 | ≈ 1 000,000 Da |
| [M + 3H]³⁺ | +3 | 334,3406 | ≈ 1 000,000 Da |
IUPAC, Definitions of terms relating to mass spectrometry (2013) · NIST, 2022 CODATA recommended values, proton mass in u
Distinguir masa, secuencia y configuración
Moléculas distintas pueden tener la misma masa intacta. Leucina e isoleucina tienen la misma composición elemental, y sustituir un residuo L por su equivalente D conserva la masa. Para obtener pruebas de secuencia, busca fragmentos informativos en MS/MS y comprueba qué posiciones cubren. Los residuos isobáricos y la estereoquímica pueden seguir sin resolverse.
Según la ambigüedad, puede ser necesaria una comparación con una referencia adecuada, un análisis estereoquímico u otro procedimiento complementario. McCarthy y colaboradores describen la caracterización de estándares peptídicos con varias técnicas. La guía de la EMA trata pruebas de identidad complementarias en solicitudes de medicamentos; no certifica los productos de investigación aquí considerados.
Una interpretación precisa podría decir: «A 5,21 min, el ion [M + 2H]²⁺ observado es compatible con el m/z monoisotópico esperado dentro de la tolerancia del método. El informe no incluye asignaciones de fragmentos». Conserva juntos espectro, ventana temporal, asignación de carga/aducto y cálculo teórico.
McCarthy et al. (2023), Reference Standards to Support Quality of Synthetic Peptide Therapeutics · EMA, Synthetic peptides guideline, §§ 2, 4.1, 4.3 and 4.4