Vergleichen Sie gemessenes und erwartetes m/z für dieselbe Ladung und dasselbe Addukt oder dekonvoluierte und theoretische Masse auf derselben Basis. Eine passende intakte Masse stützt die Identität. Sequenz und Stereochemie können zusätzliche Belege erfordern.
Chromatogramm und Spektrum zusammen lesen
Die Flüssigchromatographie trennt Komponenten über die Zeit; das Massenspektrum zeigt Ionensignale nach dem Masse-zu-Ladung-Verhältnis m/z. Prüfen Sie zunächst den chromatographischen Peak beziehungsweise das Zeitfenster, aus dem das Spektrum stammt. Ein Totalionenstrom-Chromatogramm summiert die erfassten Ionensignale des verwendeten Massenbereichs. Ein extrahiertes Ionenchromatogramm verfolgt ein ausgewähltes m/z-Fenster. Ein starkes Signal in diesem Fenster schließt gleichzeitig auftretende andere Ionen nicht aus.
Ein Spektrum kann protonierte Ionen, Addukte und Isotopenpeaks enthalten. Vor dem Theorievergleich müssen Ladung und Ionenformel klar sein. Unterscheiden Sie die monoisotopische Masse auf Basis bestimmter Isotope von der mittleren Masse auf Basis ihrer Häufigkeiten. Eine dekonvoluierte neutrale Masse wird aus gemessenen Signalen und deren Zuordnung abgeleitet.
IUPAC, Definitions of terms relating to mass spectrometry (2013)
Ladung und Massenfehler nachrechnen
Das fiktive Modell hat eine neutrale monoisotopische Masse von 1.000,0000 Da. Für ein protoniertes Ion gilt m/z = (M + z × mₚ) ÷ z, mit mₚ ≈ 1,007276 Da. Damit liegen [M + 2H]²⁺ bei etwa 501,0073 und [M + 3H]³⁺ bei etwa 334,3406. Umgekehrt gilt M = z × (m/z − mₚ). Andere Addukte benötigen ihre passende Ionenformel.
Wird das zweifach geladene Ion bei m/z 501,0088 gemessen, beträgt der vorzeichenbehaftete Fehler mit ungerundeter Theorie ungefähr +3,0 ppm: (gemessen − erwartet) ÷ erwartet × 1.000.000. Vergleichen Sie m/z mit m/z oder neutrale Masse mit neutraler Masse. Bei einer separat dekonvoluierten Masse von 1.000,0030 Da gegenüber 1.000,0000 Da ergibt sich ebenfalls +3,0 ppm. Das sind unterschiedliche Vergleichsgrundlagen.
Der fiktive Bericht MS-DEMO-02 nennt ±5 ppm für die neutrale monoisotopische Masse. Das Beispiel liegt innerhalb dieser vorgegebenen Toleranz; daraus entsteht keine allgemeingültige Toleranz für andere Methoden.
Synthetisches Lehrmodell — keine Labormessung.
| Ion | Ladung | Erwartetes m/z | Neutrale Masse |
|---|---|---|---|
| [M + 2H]²⁺ | +2 | 501,0073 | ≈ 1 000,000 Da |
| [M + 3H]³⁺ | +3 | 334,3406 | ≈ 1 000,000 Da |
IUPAC, Definitions of terms relating to mass spectrometry (2013) · NIST, 2022 CODATA recommended values, proton mass in u
Masse, Sequenz und Konfiguration unterscheiden
Verschiedene Moleküle können dieselbe intakte Masse haben. Leucin und Isoleucin besitzen dieselbe Elementzusammensetzung; der Austausch eines L-Rests gegen seinen D-Gegenpart ändert die Masse nicht. Für Sequenzbelege sind geeignete Fragmentionen im MS/MS-Bericht und deren Sequenzabdeckung relevant. Isobare Reste oder Stereochemie können dennoch offenbleiben.
Je nach Frage sind ein geeigneter Referenzvergleich, stereochemische Analysen oder andere ergänzende Verfahren erforderlich. McCarthy und Kollegen beschreiben die Charakterisierung von Peptidreferenzstandards mit mehreren Techniken. Die EMA-Leitlinie behandelt ergänzende Identitätsprüfungen im Kontext von Arzneimittelanträgen; sie ist keine Zertifizierung eines hier besprochenen Forschungsprodukts.
Eine präzise Notiz lautet beispielsweise: „Bei 5,21 min ist das beobachtete [M + 2H]²⁺ mit dem erwarteten monoisotopischen m/z innerhalb der Methodentoleranz vereinbar. Der Bericht enthält keine Fragmentzuordnungen.“ Halten Sie Spektrum, Zeitfenster, Ladungs-/Adduktzuordnung und theoretische Rechnung zusammen.
McCarthy et al. (2023), Reference Standards to Support Quality of Synthetic Peptide Therapeutics · EMA, Synthetic peptides guideline, §§ 2, 4.1, 4.3 and 4.4