Asignación de iones LC–MS: hoja de trabajo
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Modelo didáctico ficticio. No representa una secuencia peptídica, una muestra medida ni el rendimiento de un instrumento. El criterio de ±5 ppm se ha inventado para este ejercicio.
Cuatro observaciones, una zona de retención ficticia
Las cuatro filas pertenecen al grupo de retención inventado R1. Se proporcionan sus números de carga positivos. No hay un patrón isotópico del que deducir la carga; tampoco se representan intensidades de pico.
Datos de partida: usa estos valores con seis decimales tal como aparecen
Desplaza la tabla lateralmente o enfoca su área y usa las flechas izquierda y derecha.
| Fila | m/z observado sintético | Carga z proporcionada |
|---|---|---|
| A | 1235,577638 | +1 |
| B | 618,289367 | +2 |
| C | 1257,558369 | +1 |
| D | 1235,589993 | +1 |
Hipótesis y datos de entrada
Usa una masa neutra hipotética M = 1234,567890 Da. Es un valor de entrada para el cálculo, no una masa exacta calculada a partir de la fórmula de un péptido real. Considera únicamente estas tres hipótesis de ion positivo:
Hipótesis permitidas; M, p y s son los valores numéricos de las masas en Da
Desplaza la tabla lateralmente o enfoca su área y usa las flechas izquierda y derecha.
| Hipótesis de ion | Carga z | Cálculo |
|---|---|---|
| [M + H]⁺ | +1 | M + p |
| [M + 2H]²⁺ | +2 | (M + 2p) / 2 |
| [M + Na]⁺ | +1 | M + s |
Usa p = 1,0072764665789 Da para el protón y s = 22,989221 Da como incremento aproximado del ion sodio. Conserva todos los dígitos proporcionados hasta presentar el resultado final.
El valor del sodio es una aproximación didáctica redondeada: la masa atómica del sodio-23 de NIST, 22,9897692820 u, menos la masa del electrón de CODATA, 0,0005485799090441 u. Esta aproximación omite la energía de ionización. La resta sin redondear es 22,9892207020909559; el ejercicio fija s con seis decimales. Da y u designan la misma unidad de masa.
NIST CODATA 2022 · NIST: ²³Na · BIPM: Da / u
Solo en este ejercicio, una hipótesis está dentro del criterio cuando el valor absoluto del error en ppm es ≤5. Un método real necesita un criterio de aceptación adecuado y justificado; esta página no establece ninguno para el laboratorio.
Calcular, comparar e interpretar
- Calcula el m/z esperado de cada ion permitido. Para cada observación, compara solo las hipótesis compatibles con el número de carga proporcionado.
- Resta el m/z calculado al observado. Divide esa diferencia con signo entre el m/z calculado del mismo ion y multiplica por un millón.
- Conserva el signo del resultado. Compara el valor absoluto con 5 ppm y anota «dentro del criterio ficticio» o «fuera». Si ninguna hipótesis permitida cumple el criterio, deja la asignación sin resolver.
- Explica por qué B necesita un denominador distinto al de A, por qué C sugiere un posible aducto de sodio y qué pruebas adicionales faltan para asignar una estructura.
Convención de signo empleada en toda la hoja
ppm = (m/z observado − m/z calculado) / m/z calculado × 1.000.000
Un valor positivo indica que la observación supera el cálculo; uno negativo indica que es menor. Toma el valor absoluto solo al comparar con el criterio. Esta definición fija la convención de signo, que conviene comprobar al leer otro informe.
Anota tus cálculos y tu decisión
Desplaza la tabla lateralmente o enfoca su área y usa las flechas izquierda y derecha.
| Fila | Ion / z | m/z calculado | Diferencia con signo | Denominador | ppm / decisión |
|---|---|---|---|---|---|
| A | |||||
| B | |||||
| C | |||||
| D |
Justifica el denominador de B y las pruebas que siguen faltando tras una coincidencia de masa.