Asignación de iones LC–MS: soluciones
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Modelo didáctico ficticio. No representa una secuencia peptídica, una muestra medida ni el rendimiento de un instrumento. El criterio de ±5 ppm se ha inventado para este ejercicio.
Cuatro observaciones, una zona de retención ficticia
Las cuatro filas pertenecen al grupo de retención inventado R1. Se proporcionan sus números de carga positivos. No hay un patrón isotópico del que deducir la carga; tampoco se representan intensidades de pico.
Datos de partida: usa estos valores con seis decimales tal como aparecen
Desplaza la tabla lateralmente o enfoca su área y usa las flechas izquierda y derecha.
| Fila | m/z observado sintético | Carga z proporcionada |
|---|---|---|
| A | 1235,577638 | +1 |
| B | 618,289367 | +2 |
| C | 1257,558369 | +1 |
| D | 1235,589993 | +1 |
Comprobar el razonamiento
Hipótesis más próxima con carga compatible en cada fila; D sigue fuera
Desplaza la tabla lateralmente o enfoca su área y usa las flechas izquierda y derecha.
| Fila | Hipótesis | m/z calculado | ppm con signo | ±5 ppm ficticios |
|---|---|---|---|---|
| A | [M + H]⁺ | 1235,575166 | +2,000 | Dentro |
| B | [M + 2H]²⁺ | 618,291221 | −2,999 | Dentro |
| C | [M + Na]⁺ | 1257,557111 | +1,000 | Dentro |
| D | [M + H]⁺ | 1235,575166 | +12,000 | Fuera |
El resumen muestra m/z calculado con seis decimales y ppm con tres. Los cálculos siguientes y el CSV conservan las masas de entrada completas. Las diferencias respecto a +2, −3, +1 y +12 ppm exactos se deben a que las observaciones están fijadas con seis decimales.
Fila A · [M + H]⁺
m/z calculado: 1234,567890 + 1,0072764665789 = 1235,5751664665789
ppm con signo: (1235,577638 − 1235,5751664665789) / 1235,5751664665789 × 10⁶ = +2,000310 ppm
A es compatible con la hipótesis de ion monoprotonado dentro del criterio ficticio. La hipótesis de sodio queda muy lejos del límite. Superar una comparación no demuestra una estructura molecular única.
Fila B · [M + 2H]²⁺
m/z calculado: (1234,567890 + 2 × 1,0072764665789) / 2 = 618,2912214665789
ppm con signo: (618,289367 − 618,2912214665789) / 618,2912214665789 × 10⁶ = −2,999342 ppm
B es compatible con la hipótesis de ion diprotonado. Suma dos masas de protón antes de dividir entre 2. Divide su diferencia de m/z entre 618,2912214665789, no entre la masa neutra 1234,567890.
Fila C · [M + Na]⁺
m/z calculado: 1234,567890 + 22,989221 = 1257,557111
ppm con signo: (1257,558369 − 1257,557111) / 1257,557111 × 10⁶ = +1,000352 ppm
C es compatible con la hipótesis de aducto de sodio dentro de esta lista limitada de candidatos. Sigue siendo una asignación posible; el ejercicio no aporta pruebas independientes de que el sodio haya causado una señal real.
Fila D · [M + H]⁺
m/z calculado: 1234,567890 + 1,0072764665789 = 1235,5751664665789
ppm con signo: (1235,589993 − 1235,5751664665789) / 1235,5751664665789 × 10⁶ = +11,999702 ppm
D está más cerca de la hipótesis monoprotonada, pero su error de aproximadamente +12 ppm queda fuera de ±5 ppm. No fuerces la asignación, no amplíes el criterio después de ver el resultado y no llames a esta fila una impureza identificada.
Por qué importa el denominador
Para B, usar la masa neutra como denominador da aproximadamente −1,502 ppm en lugar de −2,999 ppm. También queda dentro de este límite inventado, pero responde a una pregunta de error relativo distinta. El numerador es una diferencia de m/z; por tanto, la referencia de este ejercicio es el m/z calculado del ion correspondiente.
¿Qué queda sin resolver?
El cálculo comprueba la compatibilidad con una lista reducida de hipótesis. No permite establecer una secuencia, distinguir todos los isómeros, localizar una modificación ni demostrar pureza o cantidad. Una zona de retención compartida no elimina esas ambigüedades. Sin fórmula elemental ni espectro de fragmentos, este modelo no puede convertirse en una identificación estructural.